Fig. 1 基因治疗[1][2]
TelN Protelomerase可用于合成线性闭合mini DNA载体，其在识别位点 TelRL（56bp）切割双链DNA，并在酶切位点处留下共价封闭的发夹结构，有效地将环状DNA转化为有发夹末端的线性DNA。在实际应用中会将质粒上的目的片段和骨架序列通过TelRL位点间隔。
注：在某些应用场景下，使用此酶会有专利限制。
Fig.2 TelN Protelomerase可有效将环状DNA转化为有发夹末端的线性DNA，其活性与知名供应商相当。在50 μl体系中加入323 fmol dsRNA和5 U TelN Protelomerase（1-6孔依次2倍梯度稀释，NC为对照组），37℃反应30 min。
phi29 DNA polymerase具有很强的链置换活性和连续合成的特性，可用于在体外合成双链DNA。
注：在某些应用场景下，使用此酶会有专利限制。
经TelN Protelomerase切割-连接形成的DNA载体有两类，一类含骨架序列，一类含目的片段。骨架序列上有相应的限制性酶切位点，经酶切后形成平末端或粘性末端，进一步经Exonuclease III或T5 Exonuclease作用，达到降解骨架序列，富集目的片段的目的。
Fig. 3 Exonuclease III & T5 Exonuclease有效降解BsaI线性化的双链DNA（BsaI酶切后形成5’突出末端），而对TelN Protelomerase线性化的双链DNA无影响(TelN Protelomerase线性化形成带有发夹末端的线性DNA )。在20 μl反应体系中加入2 μg 经BsaI/TelN Protelomerase处理过的双链DNA和100 U Exonuclease III/20 U T5 Exonuclease，37℃下反应30 min。
注：图中的Exo III代表Exonuclease III；T5 Exo代表T5 Exonuclease
主要参与细胞与基因治疗药物（如造血干细胞、T细胞等）的基因修饰, 其中，GMP级Cas9核酸酶于高标准的CGT蛋白酶GMP生产车间生产，并经体外胞内双重验证。已完成DMF备案（编号：036578），并已协助客户完成IND申报。
定量检测基因编辑细胞药物在回输人体之前胞外或胞内中Cas9核酸酶的残留。试剂盒检测范围为0.25 ng/ml-16 ng/ml，灵敏度可达0.125 ng/ml。
Fig. 6 拟合标准曲线，R2达到0.9997。
Fig. 7 在稀释缓冲液中检测不同浓度Cas9样本的加样回收率均介于80%-120%，表明本试剂盒检测Cas9核酸酶残留的准确度高。
使用三批次试剂盒分别对高中低三个不同浓度的Cas9核酸酶进行检测，每个样本重复检测10次，计算这10次检测的平均值(M)和标准差(SD)，计算变异系数(CV)。
如Table 1所示，每批次试剂盒检测高中低三个不同浓度的Cas9样本的CV均小于10%，表明试剂盒对Cas9的残留检测具有良好的批内重复性。
使用三批次试剂盒对高中低三个不同浓度的Cas9核酸酶进行检测，每个样本使用同批次检测10次，三批次共检测30次，计算这30次检测的平均值(M)和标准差(SD)，计算变异系数(CV)。
如Table 2所示，每个样本三个批次间的CV均小于15%，表明试剂盒对Cas9的残留检测具有良好的批间重现性。
AAV是基因治疗领域常用的病毒载体，AAV病毒颗粒滴度的检测方法有Dot blot、TEM、AUC、ELISA、SEC-MALS等。恺佧生物开发了AAV2/5/6/8/9 Titration ELISA Kit，旨在为AAV病毒颗粒滴度的测定提供更便捷、更可靠的解决方案。
Fig. 8 拟合AAV9 Titration ELISA Kit的标准曲线，其定量范围为2.03E+07-1.30E+09 capsids/ml。
ELISA间接法检测不同浓度的AAV9抗体与AAV2/5/8/9交叉结合，以检测抗体的浓度为横坐标，OD450值为纵坐标绘制曲线；ELISA夹心法检测AAV9抗体与完整AAV9以及变性AAV9的结合，以AAV9的颗粒滴度为横坐标，OD450值为纵坐标绘制曲线。
使用同一试剂盒测试高中低三个不同滴度AAV9样本在稀释缓冲液中的加样回收率。
Fig. 11 在稀释缓冲液中检测不同滴度AAV9样本的加样回收率均介于80%-120%，表明本试剂盒检测AAV9滴度的准确度高。
在基因治疗领域，主要用于药物生产过程中去除宿主DNA和质粒DNA等杂质，GMP级MaxNuclease全能核酸酶于高标准的CGT蛋白酶GMP生产车间生产，不使用含动物源原材料，分析方法经系统验证，并经过全方位的QC放行检测，满足从研发到商业大规模生产的使用需求，并且已完成DMF备案（编号：036799）。
Fig. 12 MaxNuclease降解核酸效果
定量检测基因治疗药物中MaxNuclease全能核酸酶的残留，试剂盒检测范围为46.88 pg/ml-3000 pg/ml，灵敏度可达23.44 pg/ml。
Fig. 13 拟合标准曲线，R2达到0.9995。
| 货号 | 产品名称 | 规格 | |
| TLN-BE001 | TelN Protelomerase | 10 kU/50 kU | 立即询价 |
| PHI-BE101 | phi29 DNA Polymerase | 500 U/5000 U | 立即询价 |
| EXO-EE101 | Exonuclease III | 500 U/5000 U | 立即询价 |
| T5E-PE101 | T5 Exonuclease | 1000 U/10 kU | 立即询价 |
| KACTUS-CAS9 | Cas9 Nuclease | 1 mg/3 mg | 立即询价 |
| KACTUS-CAS9-GMP | Cas9 Nuclease (GMP grade) | 3 mg | 立即询价 |
| CAS-MM00B | Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| CAS-EE111 | SpCas9 D10A Nickase | 1 mg | 立即询价 |
| CAS-EE121 | AsCas12a Nuclease | 1 mg | 立即询价 |
| CAS-EE128 | hfCas12Max® | 500 μg/1 mg | 立即询价 |
| AV2-MM00B | AAV2 Titration ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| AV5-MM00B | AAV5 Titration ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| AV6-MM00B | AAV6 Titration ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| AV8-MM00B | AAV8 Titration ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| AV9-MM00B | AAV9 Titration ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
| NUC-SE101 | MaxNuclease全能核酸酶 | 50 kU/250 kU/5 MU | 立即询价 |
| GMP-NUC-SE101 | MaxNuclease全能核酸酶(GMP grade) | 250 kU/5 MU | 立即询价 |
| NUC-SE00B | MaxNuclease ELISA Kit | 96 T | 立即询价 |
[1] 体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）
[2] Savić N, Schwank G. Advances in therapeutic CRISPR/Cas9 genome editing. Transl Res.
